一．Scienova MD100微量透析器在CyBi-Felix工作站實現(xiàn)自動化透析操作的介紹

CyBi®-FeliX 自動液體處理系統(tǒng)與 Scienova MD100 結(jié)合使用，通過尿素去|除和蛋白質(zhì)回收實現(xiàn)酶再激|活的完整透析過程。該程序被證明可以顯著提高樣品通量和處理準確性。

去|除變性劑既耗時又困難，因此，Scienova GmbH 提供了一種簡單、經(jīng)濟高|效且快速的透析系統(tǒng)，采用流行的 96 孔微孔板形式。通過其設(shè)計和低結(jié)合力再|生纖維素膜，這些“Xpress 微量透析器”（MD） 易于操作，并具有出色的樣品回收率。

二．Scienova MD100微量透析器介紹

Scienova MD100 由一個 48 深孔板、一個網(wǎng)格和六排管段組成，每排有8個管段，是一款多種節(jié)流分子量可選（3.5、6-8、12-14 kDa）的微量透析器（可同時處理 48 個樣品）。

在網(wǎng)格的幫助下，所有微型透析器都具有明確的位置和良好的抓地力。此外，網(wǎng)格中的空閑位置可用于透析時的緩沖液處理。

三．Scienova 的應(yīng)用

ü 從樣品中去|除變性劑

ü 蛋白質(zhì)、寡核苷酸、RNA 或 DNA 的樣品透析

ü 緩沖液交換、再緩沖

ü 去|除染料

ü 脫鹽

ü 樣品濃縮

四．Scienova在CyBi-Felix工作站實現(xiàn)自動化透析操作的目的

胰蛋在高尿素濃度存在下被可逆地抑|制。為了恢復胰蛋活性，需要通過釋放對硝基苯胺 （PNA） 來去|除尿素，這可以通過透析來實現(xiàn)。

為了證明蛋白質(zhì)與膜結(jié)合不會造成樣品損失，將不同的牛血清白蛋白 （BSA） 溶液透析 2 小時，并分析回收的樣品。

五．Scienova 在CyBi-Felix工作站實現(xiàn)自動化透析操作的實驗過程

以下實驗，使用了截留值為 6-8 kDa 且樣品體積為 100 μl 的 MD 100 透析管段。

實驗 1：通過去|除尿素實現(xiàn)酶再激|活

將微量透析器置于 4.4 ml 透析緩沖液中，放入網(wǎng)格中，并通過 CyBi-FeliX® 填充 100 μl 胰蛋樣品。在室溫 （22 °C） 下透析 60 分鐘，用尿素代替 40 個樣品 （n=40） 和 8 個不使用尿素的樣品 （n=8）。孵育時間后，將樣品轉(zhuǎn)移到 96 孔微孔板中進行測量。

實驗 2：BSA 回收

將微量透析器置于4.4 ml A.deion 中。放入網(wǎng)格中，并通過CyBi-FeliX®填充100μl BSA 樣品。對于每種濃度，在室溫（22℃）下透析6個樣品（n=6）和2個參比（n=2）120 分鐘。孵育時間后，將樣品轉(zhuǎn)移到 96 孔微孔板中進行測量。

六．Scienova MD100微量透析器在CyBi-Felix工作站實現(xiàn)自動化透析操作的實驗結(jié)論

下表顯示了取決于尿素濃度的 PNA 釋放速率rr。透析1小時后，尿素濃度從8M降到0.3M

結(jié)果表明，1 小時后可以恢復約 75% 的胰蛋活性。總的來說，所有 48 個樣品的標準偏差都較低，這表明具有良好的穩(wěn)定性和可重復性。Scienova MD100和 CyBi-FeliX® 的組合可在不損失質(zhì)量的情況下實現(xiàn)高樣品通量，可用于 Scienova 微量透析器的所有應(yīng)用。

圖：尿素去|除