熒光法因其具有靈敏度高，取樣量少等特點，現(xiàn)已廣泛應(yīng)用于生化、化學(xué)、藥物分析、食品檢驗、地理、冶金、醫(yī)學(xué)、環(huán)境科學(xué)和生命科學(xué)研究等各個領(lǐng)域。熒光分析法的發(fā)展與儀器應(yīng)用的發(fā)展是密不可分的。本文介紹了熒光分光光度計的結(jié)構(gòu)、分類、應(yīng)用。熒光法的固有靈敏度高,取樣量少，檢測限通常比吸收光譜法低 1~3 個數(shù)量級,可達(dá) ng ﹒ m l- 1 級；線性范圍也常大于吸收光譜,又有熒光壽命，熒光量子產(chǎn)率，激發(fā)峰波長，發(fā)射峰波長等多種參數(shù)因而有較好的選擇性。但也由于熒光法的高靈敏度,使得定量熒光法引入嚴(yán)重的基體干擾,熒光法在定量分析的應(yīng)用不如吸收光譜法,因為吸收紫外可見光的物質(zhì)種類要比吸收相應(yīng)區(qū)域輻射而產(chǎn)生熒光的物質(zhì)多。目前熒光分析法廣泛應(yīng)用于生化、化學(xué)、藥物分析、食品檢驗、地理、冶金、醫(yī)學(xué)、環(huán)境科學(xué)和生命科學(xué)研究等各個領(lǐng)域。熒光儀器是用來測定熒光物質(zhì)的性質(zhì)和含量的分析儀器，通常分兩大類：熒光光度計和熒光分光光度計。熒光分光光度計技術(shù)在現(xiàn)代科學(xué)的發(fā)展中正顯示出的作用，越來越得到人們的重視。下面將對熒光分光光度計的結(jié)構(gòu)，分類，發(fā)展和應(yīng)用作以簡單介紹。
1 熒光分光光度計的結(jié)構(gòu)
一般熒光分光光度計由光源、激發(fā)光源、發(fā)射光源、試樣池、檢測器、顯示裝置等組成。
1.1 光源
光源應(yīng)具有強度大、適用波長范圍寬兩大特點,常用光源有高壓汞燈、氙燈、氙- 汞弧燈等。此外，紫外激光器、固體激光器、高功率連續(xù)可調(diào)染料激光器和二極管激光器等熒光光源把熒光法的應(yīng)用范圍拓寬。
1.2 濾光片和單色器
在熒光光度計中，通常采用干涉濾光片和吸收濾光片作為激發(fā)光束和熒光輻射的波長選擇器。在熒光分光光度計中至少選用一個，而常常是用兩個光柵單色器，且均帶有可調(diào)狹縫，以供選擇合適的通帶。理想的單色器應(yīng)在整個波長區(qū)內(nèi)有相同的光子通過效率，不幸的是這種理想的單色器不存在。
1.3 檢測器
一般普通的熒光分光光度計均采用光電倍增管作為檢測器。它是很好的電流源，在一定條件下其電流量與入射光強度成正比。此外，還有光導(dǎo)攝像管、電子微分器、電荷耦合器陣列檢測器。
1.4 顯示裝置
以前，顯示裝置有數(shù)字電壓表，記錄儀和陰極示波器等，現(xiàn)在，人們可以通過計算機(jī)軟硬件技術(shù)根據(jù)不同要求，來選擇不同的直觀的視頻讀出方式。
2 熒光分光光度計分類
熒光分光光度計的發(fā)展經(jīng)歷了手控式熒光分光光度計，自動記錄式熒光分光光度計，計算機(jī)控制式熒光分光光度計三個階段；熒光分光光度計還可分為單光束式熒光分光光度計和雙光束式熒光分光光度計兩大系列。其他的還有低溫激光Sh p ol’skill熒光分光光度計，配有壽命和相分辯測定的熒光分光光度計等。
3 熒光分光光度計應(yīng)用
理論上，具有剛性結(jié)構(gòu)和平面結(jié)構(gòu)的分子；π電子共軛體系的分子；給電子取代基的化合物都可用直接熒光法測定。間接熒光法測定是目標(biāo)分析物本身不具備熒光發(fā)射能力,但具備使某種熒光物質(zhì)熒光猝滅的能力,或者可以通過氧化還原偶聯(lián)酶催化等手段使其轉(zhuǎn)化為熒光物質(zhì),而進(jìn)行間接測定。以下是熒光分光光度計在現(xiàn)代各科學(xué)領(lǐng)域中的應(yīng)用：
3.1 環(huán)境檢測領(lǐng)域:
熒光分光光度計檢測技術(shù)已經(jīng)成為環(huán)境污染監(jiān)測中污染物定性和定量分析的有效手段。如不同類型不
同場地的石油及其產(chǎn)品成份各有不同,其熒光光譜也有著顯著的區(qū)別,利用油標(biāo)可在激發(fā) 310nm ,發(fā)射 365 nm處測量淤泥和海水中油污樣品中總油的含量.還可以對機(jī)油、柴油、重油、原油及液壓油進(jìn)行初步鑒定 ；空氣塵埃中多環(huán)芳烴的檢測。其他如陰離子表面活性劑作為洗滌劑污染的主要成份,葉綠素a、葉綠素b、脫鎂葉綠素 a 和脫鎂葉綠素 b 作為水環(huán)境浮游植物生物量和水體富營養(yǎng)化的重要指標(biāo)以及多環(huán)芳烴等都可用熒光分光光度計測量。
3.2 食品和藥物成份分析領(lǐng)域：
曾用熒光法分析食品和藥品中的化合物如：: 、1、B2（核黃素）、B6 、B1 2、C(或蝶酰)、、 、(生育酚)、(蘆丁)、維生素F（）、，抗生素藥中的青梅毒、、四環(huán)素、抗霉素、和 等，抗瘧疾藥中的奎寧、瘧滌平、撲瘧母星、嘧啶甲胺和利凡諾等，麻醉藥中的醇、嘜啶鹽酸鹽、四氫醇、、那可汀、吐根酚堿、依米丁、堿鹽酸鹽、毛果（蕓香）鹽酸鹽、弗勒可丁、二丁卡因、酸二乙胺等，鎮(zhèn)痛藥中、、消炎痛等，鎮(zhèn)靜藥中的、苯并二氮雜卓、、等以及吩噻嗪類藥物、奎諾酮類藥物、、、6 - 巰基嘌呤等。
3.3 醫(yī)學(xué)和生命科學(xué)及其相關(guān)領(lǐng)域:
多種氨基酸的分析、在肌肉和心臟疾病中非常注意細(xì)胞內(nèi)離子濃度的測定；核糖核酸（R N A ）和
脫氧核糖核酸（D N A ）的相關(guān)研究，如 D N A 、R N A的檢測和定量，用以鑒別病毒細(xì)菌等的 DNA/酶相互作用研究，DNA 密碼的改變導(dǎo)致癌癥病因研究，能斷裂 DNA 限制酶測定，熒光PCR(DNA 的放大)的研究等;蛋白質(zhì)和酶的作用研究，如 DNA 的表達(dá)、細(xì)胞膜流動性及細(xì)胞膜內(nèi)蛋白質(zhì)研究、涉及抗體、蛋白質(zhì)和酶的ELISA 測定研究、酶活性測定等。尤其是各種新型蛋白和核酸熒光標(biāo)記物的引入，各種熒光酶聯(lián)免疫分析技術(shù) 、偏振熒光測定技術(shù)以及為克服生物樣品紫外區(qū)背景熒光和散射光的嚴(yán)重干擾而提出的近紅外區(qū)熒光測定技術(shù)的發(fā)展，為醫(yī)學(xué)和生命科學(xué)領(lǐng)域提供了豐富的研究手段。
